wempigembulzblog

Uji nitrat

Beberapa mikroorganisme mampu menggunakan molekul bukan oksigen sebagai akseptor elektron terakhir. Bila akseptor terakhir ini bukan merupakan osigen, maka mikroorganisme tersebut mekaksanakan respirasi anaerobik. Nitrat digunakan oleh mikroorganisme tertentu sebagai akseptor elektron terakhir ; nitrat ini direduksikan menjadi nitrit. Beberapa mikroorganisme mereduksikan nitrit menjadi N₂.

Kemampuan mereduksikan nitrat dapat digunakan sebagai ciri dalam identifikasi bakteri. E.coli dan Pseudomonas aeruginosa mampu menggunakan nirat sebagai akseptor elektron terakhir ; E.coli mereduksikannya menjadi nitrit sedangkan P.aeruginosa mampu mereduksikannya lebih lanjut menjadi N₂. sebaliknya S.epidermidis tidak dapat mengguanakan nitrat sebagai akseptor elektron terakhir.

Uji nitrat dilakukan dengan menumbuhkan mikroorganisme dalam kaldu nutrien yang mengandung 5 % kalium nitrit dan tabung Durham. Setelah masa inkubasi, diperhatikan adanya gas dalam tabung Durham dan nitrit dalam media biakan. Gas yang tertangkap dalam tabung Durham merupakan campuran gas nitrogen dan karbon dioksida. Gas nitrogen berasal dari penguraian sempurna nitrat sedangkan karbon dioksida berasal dari siklus krebs ; gas karbon dioksida merupakan produk respirasi anaerbik. Keberadaan nitrit dalam media biakan diuji dengan asam sulfanilat dan α-naphtylamin. Nitrit dalam media biakan akan bereaksi dengan kedua bahan tersebut dan terlihat sebagai perubahan waran menjadi merah atau merah muda.

α-naphtylamin bersifat karsinogenik sehingga asam sulfamat dapat digunakan sebagai pengganti asam sulfanilat dan α-naphtylamin. Penambahan beberapa tetes asam sulfamat (4 gram asam sulfamat dalam 100 ml 20% H2SO4) dalam media biakan yang mengandung nitrit menyebabkan pembentukan gelembung gas nitrogen sebagai hasil reduksi nitrti menjadi gas nitrogen.

Dalam praktikum digunakan asam sulfanilat dan α-naphtylamin, karena kedua larutan ini lazim digunakan dalam laboratorium diagnostik. Bila digunakan asam sulfamat cara pengujian sama. Hasil pengujian positif bila terlihat gelembung gas.